深夜的圣玛丽医院，两名性格迥异的夜班护士萝丝与瓦莱丽被迫搭档。医院近期频发离奇事件：药品无故失踪、监控录像异常、病患突发意外。当她们发现这些事件都与二十年前一场医疗事故有关时，一场针对医院的复仇阴谋逐渐浮出水面。
截然不同的夜班搭档
萝丝是医院最资深的护士，做事严谨刻板，严格遵守每项操作规程。新人瓦莱丽则活泼外向，常因不按流程操作与萝丝发生争执。院方为平衡夜班人力，将这对水火不容的搭档安排在同一班组，谁都没预料到这个决定会揭开医院最黑暗的秘密。
医院里的异常现象
第三个夜班开始，瓦莱丽在药房清点药品时发现麻醉剂数量异常。同一晚，萝丝负责的病患突然出现不明原因的心律失常。更诡异的是，监控录像显示事发时病房里除了病人空无一人。这些异常现象引起两位护士的警觉，她们决定暗中调查。
尘封的医疗事故档案
在档案室翻找资料时，她们发现二十年前有位叫丽莎的护士因用药错误导致病人死亡，事后丽莎跳楼自杀。但细心的瓦莱丽注意到，当年涉事医生的证词存在明显矛盾。随着调查深入，她们发现现任外科主任布莱克医生与这起事故有密切关联。
危险的真相逼近
当她们试图调取更多证据时，医院系统突然瘫痪，档案室的门被反锁。黑暗中，有人悄悄接近。危急关头，萝丝用专业急救知识制造烟雾警报，两人得以脱险。这次死里逃生让她们意识到，有人不惜杀人也要掩盖真相。
联手对抗医院阴谋
性格差异反而成为优势：萝丝的缜密思维与瓦莱丽的冒险精神完美配合。她们找到丽莎生前留下的日记，揭露布莱克医生为掩盖手术失误，栽赃陷害丽莎的真相。现在，他正用同样手法清除知晓内情的医护人员。
真相与救赎
在院庆日当天，两位护士当众播放了收集的证据。布莱克医生的复仇计划败露，警方介入调查。经历生死考验的萝丝和瓦莱丽，从互相看不顺眼的同事变成挚友。影片最后，晨光中离开医院的背影，象征着她们战胜黑暗后的新生。
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